Көптеген вирустардың геномдық тізбегі белгілі болды.ДНҚ-ның қысқа сегменттері болып табылатын нуклеин қышқылы зондтары комплементарлы вирустық ДНҚ немесе РНҚ сегменттерімен будандастыруға арналған.Полимеразды тізбекті реакция (ПТР) вирусты анықтаудың тиімді әдісі болып табылады.Жақында жоғары өнімді диагностикалық әдістер әзірленді.
A. Нуклеин қышқылын будандастыру техникасы
Нуклеин қышқылын будандастыру, оның ішінде, негізінен, оңтүстік блоттинг (Оңтүстік) және Солтүстік блоттинг (Солтүстік) вирус диагностикасы саласындағы жылдам дамып келе жатқан жаңа әдіс болып табылады.Гибридизация талдауының негіздемесі қосымша вирустық ДНҚ немесе РНҚ сегменттерімен будандастыруға арналған ДНҚ-ның қысқа сегменттерін («зонд» деп аталады) пайдалану болып табылады.Қыздыру немесе сілтілі өңдеу арқылы қос тізбекті мақсатты ДНҚ немесе РНҚ бір тізбектерге бөлінеді, содан кейін қатты тірекке иммобилизацияланады.Осыдан кейін зонд қосылады және мақсатты ДНҚ немесе РНҚ-мен будандастырылады.Зонд изотоппен немесе радиоактивті емес нуклидпен таңбаланғандықтан, мақсатты ДНҚ немесе РНҚ авторрадиография немесе биотин-авидин жүйесі арқылы анықталуы мүмкін.Вирустық геномдардың көпшілігі клондалған және реттелген болғандықтан, оларды үлгідегі зондтар ретінде вирусқа тән тізбектерді пайдалану арқылы анықтауға болады.Қазіргі уақытта будандастыру әдістеріне мыналар кіреді: нүктелі бөртпе , жасушаларда in situ будандастыру , ДНҚ блоттау (ДНҚ) (Оңтүстік дақ) және РНҚ блоттауы (РНҚ) (Солтүстік дақ).
B.PCR технологиясы
Соңғы жылдары сезімтал емес немесе өсірілмейтін вирустарды сынау үшін ПТР негізінде нуклеин қышқылын in vitro күшейту әдістерінің сериясы әзірленді.ПТР - in vitro полимераза реакциясы арқылы нақты ДНҚ тізбегін синтездей алатын әдіс.ПТР процесі үш кезеңнен тұратын термиялық циклді қамтиды: денатурация, жасыту және ұзарту Жоғары температурада (93℃~95℃) қос тізбекті ДНҚ екі жалғыз ДНҚ тізбегіне бөлінеді;содан кейін төмен температурада (37℃~60℃) екі синтезделген нуклеотидті праймер комплементарлы ДНҚ сегменттеріне қосылады;ал Taq ферменті үшін сәйкес температурада (72℃) жаңа ДНҚ тізбектерінің синтезі шаблондар ретінде комплементарлы ДНҚ және материал ретінде жалғыз нуклеотидтер арқылы праймер 3-ұшынан басталады.Сондықтан әрбір циклден кейін бір ДНҚ тізбегін екі тізбекке күшейтуге болады.Бұл процесті қайталай отырып, бір циклде синтезделген әрбір ДНҚ тізбегін келесі циклде үлгі ретінде пайдалануға болады, ал ДНҚ тізбектерінің саны әр циклде екі есе артады, яғни ПТР өндірісі 2n журналдық жылдамдықта күшейтіледі.25-30 циклден кейін ПТР өндірісі электрофорез арқылы анықталады және арнайы ДНҚ өнімдерін ультракүлгін сәуле (254нм) астында байқауға болады.Ерекшелігі, сезімталдығы және ыңғайлылығы үшін ПТР көптеген вирустық инфекциялардың, мысалы, HCV, АИВ, CMV және HPV клиникалық диагностикасында қабылданған.ПТР өте сезімтал болғандықтан, ол вирустың ДНҚ-сын fg деңгейінде анықтай алады, жалған оң нәтиже бермеу үшін операцияны өте мұқият орындау керек.Сонымен қатар, нуклеин қышқылы сынағының оң нәтижесі үлгіде тірі инфекциялық вирус бар дегенді білдірмейді.
ПТР техникасын кеңінен қолдану арқылы әртүрлі сынақ мақсаттары үшін ПТР техникасына негізделген жаңа әдістер мен әдістер әзірленді.Мысалы, нақты уақыттағы сандық ПТР вирустық жүктемені анықтай алады;in situ ПТР тіндерде немесе жасушаларда вирустық инфекцияны анықтау үшін қолданылады;Кірістірілген ПТР ПТР ерекшелігін арттыра алады.Олардың ішінде нақты уақыттағы сандық ПТР жылдамырақ әзірленді.TaqMan гидролиздік зонд, гибридтеу зонды және молекулалық маяк зонды сияқты көптеген жаңа әдістер клиникалық зерттеулерде кеңінен қолданылатын нақты уақыттағы сандық ПТР әдісіне біріктірілді.Пациенттердің дене сұйықтығындағы вирустық жүктемені дәл анықтаумен қатар, бұл әдісті дәріге төзімді мутантты анықтау үшін де қолдануға болады.Сондықтан нақты уақыттағы сандық ПТР негізінен емдік әсерді бағалауда және есірткіге төзімділікті қадағалауда қолданылады.
C. Вирустық нуклеин қышқылдарын жоғары өткізу қабілетімен анықтау
Жаңа пайда болатын жұқпалы ауруларды жылдам диагностикалау қажеттіліктерін қанағаттандыру үшін ДНҚ чиптері (ДНҚ) сияқты әртүрлі жоғары өнімді анықтау әдістері орнатылды.ДНҚ чиптері үшін арнайы зондтар синтезделеді және үлгімен будандастыруға болатын ДНҚ зондының микромассивін (ДНҚ) қалыптастыру үшін өте жоғары тығыздықтағы шағын кремний чиптеріне бекітіледі.Гибридизация сигналы конфокальды микроскоппен немесе лазерлік сканермен бейнеленеді және одан әрі компьютерде өңделеді және әртүрлі гендерге қатысты үлкен деректер жиынтығын алуға болады.ДНҚ чипінің екі түрі бар.«Синтез чипі» келесідей: арнайы олигонуклеотидтер тікелей чиптерде синтезделеді.Тағы бірі - ДНҚ пулының чипі.Клондалған гендер немесе ПТР өнімдері слайдқа ретімен басып шығарылады.ДНҚ чип технологиясының артықшылығы - ДНҚ тізбегінің үлкен санын бір уақытта анықтау.Патогенді анықтау чипінің соңғы нұсқасы бір уақытта 1700-ден астам адам вирусын анықтай алады.ДНҚ чипінің технологиясы нуклеин қышқылын гибридизациялаудың дәстүрлі әдістерінің мәселелерін шешті және вирустық диагностика мен эпидемиологиялық зерттеулерде өте кең қолданбаларға ие.
Жіберу уақыты: 23 желтоқсан 2020 ж